Desmond Miles consigue escapar de su cautiverio y, con ayuda de unos nuevos aliados, podrá usar sus recién adquiridos conocimientos contra los templarios. Gracias a un nuevo dispositivo de recuperación de memoria revivirá las memorias de Ezio Auditore di Firenze, un noble italiano del siglo XV joven y despreocupado con afición por las peleas y las faldas. Todo eso cambiará cuando su padre y su pequeño hermano son ejecutados públicamente por un hombre en quien él confiaba. Guiado por la venganza, Ezio descubre que su padre pertenecía a la orden de los asesinos y decide emprender el camino en busca de justicia para aquellos a los que amaba.